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同靶标的抗体有好多,如何众里挑一?
小编经常收到客户的咨询,同一靶标为什么会有很多种抗体?不同货号的抗体为什么抗体形式不一样?使用上到底有什么区别?现在,小编将经验分享给大家,说明一下目前市售抗体不同的抗体形式。以后,您再选择抗体的时候,妥妥的!!!
市售抗体按照是否经过纯化可以分为未纯化抗体和纯化抗体两大类。
01、未纯化抗体
1)抗血清
抗血清是指已经除去了凝血蛋白和血红细胞的免疫宿主的血液。抗血清包含所有种类的抗体/免疫球蛋白以及其它血清蛋白。它所包含的不仅有识别靶抗原的抗体,还有识别非靶抗原的抗体,在免疫分析中有时会发生非特异性反应。由于这个原因,小编建议您选择抗体时尽量避免选择这种类型的抗体。
2)组织培养上清
单克隆抗体可以通过杂交瘤细胞培养(细胞分泌性抗体)并收获杂交瘤组织培养上清来获得。该类型的抗体浓度一般不太高,导致具体实验的时候稀释度较低。
3)腹水
单克隆抗体可以通过在小鼠(或大鼠)的腹腔中生长杂交瘤细胞而产生。杂交瘤细胞注射入小鼠以后,就会在小鼠腹腔繁殖并产生液体(腹水)。这种腹水就包含了高浓度的可收获抗体,比杂交瘤细胞培养有更高的抗体产量。
02、纯化抗体
1)蛋白A/G纯化
蛋白 A/G 纯化是应用金黄色葡萄球菌的蛋白 A 或链球菌的蛋白G对免疫球蛋白 Fc 段的高亲和性进行纯化。蛋白 A/G 纯化从粗制抗血清中去除了血清蛋白,但没有去除非特异的抗体。因此,经过蛋白 A/G 纯化的抗体仍然具有一小部分不期待的交叉反应性。
2)亲和纯化
亲和纯化就是将免疫原偶联于层析填料上,利用层析原理进行纯化。 抗原亲和纯化的优势是免疫球蛋白能够特异性地同刺激它产生的抗原进行结合,结果消除了大量的非特异抗体,将能特异与靶抗原相结合的抗体富集。因此亲和纯化后获得的主要是含所期待的特异性抗体。
3)预吸附
这种抗体形式常见于二抗。它们被不同物种来源的抗体或血清吸附,以消除与其他物种一抗可能的交叉反应。这样纯化后的抗体纯度和特异性提高,交叉反应被显著减少。
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