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GST标签蛋白纯化攻略
GST(谷胱甘肽S-转移酶)能特异的与其底物谷胱甘肽结合。根据此原理,融合有GST标签的目的蛋白可以与带谷胱甘肽配基的亲和介质特异结合,再用酶将GST标签切除,即可得到单纯的目的蛋白。GST融合蛋白纯化具有很多优势,如纯度高、纯化条件温和、蛋白活性不受影响、高可溶性等。
今天先介绍——GST标签蛋白纯化的方法,小伙伴们快来围观吧~
GST 标签蛋白纯化方案
GST融合蛋白可以通过亲和层析方便地从细菌裂解物中被纯化。使用Glutathione Sehparose介质,标签蛋白与配体结合,杂质通过结合缓冲液被洗脱去除,之后标签蛋白在温和、非变性的条件下被洗脱,使得蛋白的抗原性能和功能得以保护。
常用的纯化介质及选择:
批量处理/重力(无需设备)
预装柱(搭配AKTA层析系统 )
其它配套
小贴士
GST融合蛋白容易氧化形成二聚体,影响纯化效果,所以经常会在结合及洗脱缓冲液中添加1-10mM DTT。
GST融合标签是酶与底物的亲和作用,变性剂存在的时候,是无法结合到柱子上的。
GST 标签蛋白纯化填料——不同类型产品满足您的不同需要
GSTrap 4B & Glutathione Sepharose 4B
这款填料所选用的Sepharose 4B基架,是经典的高载量基架,在许多其它填料结合效率不好的实验中,它也能有很好的表现。
GSTrap FF & Glutathione Sepharose 4 FF
FF代表着高流速并且适合后期的工艺放大。但是GST标签蛋白与配基的结合是酶与底物的反应,速度较慢,过高的流速会影响结合效率。
GSTrap HP & Glutathione Sepharose HP
HP填料的平均粒径更小,约为34μm,分辨率更高,使得结合在填料上的蛋白能够被更集中地洗脱下来,所以浓度和纯度更高。但反压也相对较高,适合有ÄKTA设备或者蠕动泵的客户。
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