机体在受到病原体攻击后产生相应的免疫反应，如免疫细胞亚群、细胞因子水平的变化，可作为临床诊疗参考指标；在免疫反应检测过程中，流式细胞仪是必不可少的工具之一。今天就来介绍一款服务在疫情第一线的流式细胞仪。

1 Guava—传染病研究中发挥的作用

Luminex公司旗下Guava® easyCyte™ 微毛细管流式细胞仪具有灵敏度高、废液少(ml级)等特点，在流行病特别是急性传染病研究中具有明显优势。

埃博拉疫情期间，Guava多参数流式细胞仪就已经投入到了疫区第一线。科学家在《Nature》杂志上发文，利用Guava 8在位于几内亚埃博拉疫区的流动实验室中建立了对患者的持续跟踪体系，利用PBMC样本评估患者自发病到治愈/死亡期间不同阶段的免疫反应，从而在死亡患者体内发现了一类特异性的T细胞亚群，并提出了利用已有药物靶向这类T细胞进行治疗的可能性[ref 1]。

划重点啦！

Guava在传染病研究中的优势

1. 废液少：每运行8小时仅产生 <50 ml的废液量，适用于感染性材料的研究；

2. 体积小：结构紧凑，整体化程度高，便于运输，安装、维护简便；

3. 性能稳定：确保产生的数据质量。

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2 Guava—病毒颗粒检测

常规检测病毒和/或病毒颗粒的透射电子显微镜、ELISA、病毒滴定等方法无法分析各类病毒比例或区分感染性与非感染性病毒颗粒。

流式细胞仪能够直接检测单个病毒颗粒及其特征。Landowski等人单独使用抗体直接检测病毒样颗粒(NiVLPs)，开发出新的流式病毒学研究工具，可高通量测量病毒动力学，研究病毒颗粒表面糖蛋白比例[ref 2]。

作者利用Guava 8HT检测发现，相较于下图A中PBS缓冲液，图B中VLPS病毒FSC/SSC信号可以很好的与背景分开。图C-F显示分别连接了1种、2种和3种不同病毒糖蛋白片段后VLPs在四象限门内的表达变化。

Guava的超高灵敏度确保在针对如病毒等微小颗粒的检测中，不仅能够对目标实现清晰分群，还可以对病毒入侵细胞的机理进行分析研究。

3 Guava—免疫分型研究 

免疫细胞计数和分型是评估病毒感染后机体免疫反应的重要参数，流式则是必不可少的检测手段。

武汉协和医院的研究团队发表在预印本平台MedRxiv上的一篇文章描述了不同疾病严重程度的新冠患者外周血淋巴细胞亚群比例变化[ref 3]。分析显示：

1. 重症患者入院时外周血淋巴细胞的绝对计数显著低于轻症患者，而白细胞和中性粒细胞的绝对计数明显高于入院时的轻症患者(下图)。

2. 与轻症患者相比，重症患者CD3+ T细胞、CD4+和CD8+T细胞亚群计数持续下降，而B细胞和NK细胞计数无显著性差异(下图)。

3. 进一步评估中性粒细胞/CD8+T细胞比例(N8R)、中性粒细胞/淋巴细胞比例(NLR)、嗜中性粒细胞计数(NEC)、白细胞计数这4个变量。详细统计分析结果显示N8R可作为监测重症患者的预后指标。

Tips:

Guava免疫分型多色实验方案

1. 取10 μl 成人全血，与抗CD45，CD3，CD4，CD8，CD16，CD56，CD19，CD45 RA和CD62L抗体混合，室温孵育20分钟；

2. 加入180 μl 裂解液，室温反应15 分钟，上机检测。

3. 圈门：

• CD45+的淋巴细胞进一步用SSC vs. CD3圈门；

• T细胞(CD3+/CD45+)再用CD4 vs. CD8圈门；

• CD4+和CD8+的T细胞分别用CD45RA和CD62L区别原始和记忆细胞。

• CD3-细胞进一步分为CD19+的B细胞和CD16+/CD56+的NK细胞。

如图所示，T、B、NK各细胞亚群清晰可见，并可对各细胞亚群进行绝对计数，提供准确检测结果。

Reference：

1. Paula Ruibal et al. Nature, 533 (2016): 100–104.

2. Matthew Landowski et al. Journal of Virology, 88 (2014): 14197–14206.

3. Jing Liu et al. Longitudinal characteristics of lymphocyte responses and cytokine profiles in the peripheral blood of SARS-CoV-2 infected patients. medRxiv, doi: https://doi.org/10.1101/2020.02.16.20023671

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